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HIV实验室SOP文件54


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成高子镇中心卫生院检验科

责 任 部 门 文 件 编 号 版 次 / 页 码

检 验 科

HIV 筛查实验点 SOP 文件

SOP-MY-HIV-5
第 1 版第 1 次修改 第 54 页 共 70 页

Ⅱ、HIV 测定(ELISA 法、北京万泰)
1、检验目的 :应用双抗原夹心酶联免疫法原理(ELISA)定性检测人血清、血 浆标本中的 HIV(1+2)型抗体的测定,用于 HIV 感染的辅助诊断,抗 HIV 药物治 疗的效果的监测。 2、原理 采用夹心 ELISA 方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型 抗体,预包被高纯度基因重组 HIV(1+2)型抗原,可与标本中的抗-HIV 抗体反 应,加入 HRP 标记 HIV(1+2)型抗体抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合 物,然后加入 TMB 底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度(OD 值) ,根据 OD 值判断 HIV 抗体的存在与否。 3、性能参数 4、标本要求 (1)标本类型:血清,血浆。 (2)标本采集:见标本采集手册 (3)标本储存和运输:室温放置不超过 8 小时,2-8℃不超过 72 小时,-20℃ 可长期保存,应避免反复冻融 (4)标本拒收状态:细菌污染,严重溶血或脂血标本不能作测定。 5、容器和添加剂类型 6、试剂 (1)试剂名称:人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。 (2)试剂生产厂家:北京万泰生物药业有限公司 (3)包装规格:96T/Kit (4)试剂盒组成:①、HIV 酶标板;②、HIV 酶标试剂;③、HIV(1+2)型阳 性及阴性对照血清;④、显色剂 A 液和 B 液;⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、 自封袋、封板膜、说明书等。 7、仪器设备: 酶标仪:ELX800,每年由计量单位进行一次校准。
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灵敏度高(0.5ng/ml)

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SOP-MY-HIV-5
第 1 版第 1 次修改 第 55 页 共 70 页

洗板机:TECAN,每年由国家计量单位进行一次校准。 移液器:上海求精,每年由国家计量单位进行一次校准。 8、校准程序 9、操作步骤 ①、配液:将 50ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 20 倍稀释至 1000ml 备 用。 ②、编号:将样品对应微孔按序编号,每板设阴性对照 3 孔、阳性对照Ⅰ型、 Ⅱ型各 1 孔,空白对照 1 孔。 ③、加样:分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照 100μ l,用封板膜 封板后置 37℃温育 30min。 ④、洗涤:小心把封板膜揭去,用洗板机选择 5 次程序,洗板后拍干。 ⑤、加酶:每孔加酶结合物 100μ l(空白对照孔除外) ,充分混匀,用封板 膜封板后置 37℃温育 30min。 ⑥、洗涤:小心把封板膜揭去,用洗板机选择 5 次程序,洗板后拍干。 。 ⑦、显色:每孔加入显色剂 A 液和 B 液各 50μ l,轻轻振荡混匀,封板后置 37℃避光显色 15min。 ⑧、测定:每孔加终止液 50μ l,轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为 450nm (建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长 630 nm) ,空白调零,读取各孔 OD 值。 ⑨、判断结果:计算临界值(cut-off) (CO)值。 临界值=阴性对照 A 均值+0.12 正常情况下,阴性对照孔的 OD 值≤0.10(若 1 孔阴性对照的 OD 值>0.1 应 舍弃,若有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的 OD 值>0.1,应重复实验。 ) 。样品 OD 值 <临界值者为 HIV 抗体阴性。 正常情况下,阳性对照孔的 OD 值≥0.80(若 1 孔阳性对照的 OD 值<0.8 应 舍弃,若有 2 孔或 2 孔以上阳性对照的 OD 值<0.8,应重复实验。样品 OD 值≥ 临界值者为 HIV 抗体阳性。 注意:对于筛查阳性标本,应重新取样双孔复试,复试阳性者应按照《全国 HIV 检测管理规范》送 HIV 确证实验室进行确证试验。 送嘉峪关市计量检测所校准

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第 1 版第 1 次修改 第 56 页 共 70 页

10、质量控制: 每块板设阴阳性及空白对照,并于每次试验用自制质控血清作质控,将质控 血清孔 OD 值采用“即刻法”计算或标在质控图上,如质控有效,表明试验可靠; 如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确, 直至重新试验使其在控。

11、干扰和交叉反应 12、生物参考区间 正常人阴性。 阳性表示 HIV 病毒感染。

13、患者检验结果的可报告区间 14、临床意义 15、其它:

用于 HIV 感染的辅助诊断,抗 HIV 药物治疗的效果的监测。

按规定必须使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有 " 检定合格 " 防伪标 签的试剂。

Ⅲ、HIV 测定(ELISA 法、上海科华)
1、检验目的 应用双抗原夹心酶联免疫法原理( ELISA)定性检测人血清、血浆标本中的 HIV(1+2)型抗体的测定,用于 HIV 感染的辅助诊断,抗 HIV 药物治疗的效果的 监测。 2、原理 采用夹心 ELISA 方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型 抗体,预包被高纯度基因重组 HIV(1+2)型抗原,可与标本中的抗-HIV 抗体反 应,加入 HRP 标记 HIV(1+2)型抗体抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合 物,然后加入 TMB 底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度(OD 值) ,根据 OD 值判断 HIV 抗体的存在与否。 3、性能参数 灵敏度高(0.5ng/ml)

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4、标本要求 (1)标本类型:血清,血浆。 (2)标本采集:见标本采集手册

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第 1 版第 1 次修改 第 57 页 共 70 页

(3)标本储存和运输:室温放置不超过 8 小时,2-8℃不超过 72 小时,-20℃ 可长期保存,应避免反复冻融 (4)标本拒收状态:细菌污染,严重溶血或脂血标本不能作测定。 5、容器和添加剂类型 6、试剂 (1)试剂名称:人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。 (2)试剂生产厂家:上海科华生物工程股份有限公司 (3)包装规格: 96T/Kit (4)试剂盒组成:①、HIV 酶标板;②、HIV 酶标试剂;③、HIV(1+2)型阳 性及阴性对照血清;④、显色剂 A 液和 B 液;⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、 自封袋、封板膜、说明书等。

7、操作步骤 ①、配液:将 50ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 25 倍稀释至 1000ml 备 用。 ②、编号:将样品对应微孔按序编号,每板设阴性对照 2 孔、阳性对照 3 孔, 空白对照 2 孔。 ③、加样:分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照 100μ l,用封板膜 封板后置 37℃温育 60min。 ④、洗涤:小心把封板膜揭去,用洗板机选择 5 次程序,洗板后在干净纱布 上拍干。 ⑤、加酶:每孔加酶结合物 100μ l(空白对照孔除外) ,充分混匀,用封板 膜封板后置 37℃温育 30min。 ⑥、洗涤:小心把封板膜揭去,用洗板机选择 5 次程序,洗板后在干净纱布 上拍干。

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