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HIV实验室SOP文件54


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成高子镇中心卫生院检验科

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检 验 科

HIV 筛查实验点 SOP 文件

SOP-MY-HIV-5
第 1 版第 1 次修改 第 58 页 共 70 页

⑦、显色:每孔加入底物缓冲液 50μ l,TMB 50μ l,轻轻振荡混匀,封板后 置 37℃避光显色 10min。 ⑧、测定:每孔加终止液 50μ l,轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为 450nm (建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长 630 nm) ,空白调零,读取各孔 OD 值。 ⑨、判断结果:计算临界值(cut-off)值。 临界值=阳性对照值×10%。 (若阳性对照 OD 值>2.5 按 2.5 计算) 正常情况下,阴性对照孔的 OD 值≤0.08。样品 OD 值<临界值者为 HIV 抗体 阴性。若 1 孔阴性对照的 OD 值>0.08 应舍弃,若有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的 OD 值>0.08,应重复实验。 正常情况下,阳性对照孔的 OD 值≥0.80。样品 OD 值≥临界值者为 HIV 抗体 阳性。若 1 孔阳性对照的 OD 值<0.8 应舍弃,若有 2 孔或 2 孔以上阳性对照的 OD 值<0.8,应重复实验。 注意:对于筛查阳性标本,应重新取样双孔复试,复试阳性者应按照《全国 HIV 检测管理规范》送 HIV 确证实验室进行确证试验。 10、质量控制: 每块板设阴阳性及空白对照,并于每次试验用自制质控血清作质控,将质控 血清孔 OD 值采用“即刻法”计算或标在质控图上,如质控有效,表明试验可靠; 如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确, 直至重新试验使其在控。 11、干扰和交叉反应 12、生物参考区间 正常人阴性。 阳性表示 HIV 病毒感染。

13、患者检验结果的可报告区间 14、临床意义 15、其它:

用于 HIV 感染的辅助诊断,抗 HIV 药物治疗的效果的监测。

必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有 " 检定合格 " 防伪标 签的试剂。

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SOP-MY-HIV-5
第 1 版第 1 次修改 第 59 页 共 70 页

第 46 页 共

HIV 测定(ELISA 法、山东 3V)
1.检验目的 主要是用于人类免疫缺陷病毒的的诊断、了解病毒感染者的恢复情况、疗效 观察及预后评估。 2.方法原理 采用 ELISA 夹心法,反应的微孔板包被基因工程重组 HIV Ag,加入待测血液,洗板后, 再加入 HIV Ag-HRP,与抗原形成结合,加入底物 TMB 时显色,判断阴阳性结果。 3.性能指标 4.标本收集 4.1 标本类型:静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本(抗凝剂可用肝 素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1 或 EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分 析纯,使用的比例以厂家推荐为准) ;其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、 乳汁等体液可以作为检测标本,但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。 4.2 标本留取:以空腹为宜,收到标本后最好立即离心留取血清或血浆(凝固血应待 其充分凝固后收集血清) ,不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝,使用肝素治疗的病人宜在肝 素治疗前抽血。 4.3 标本保存:留取的标本最好在 3 小时内检测,不能立即检测的应放置于 2-8℃最长 达 14 天(可以含有凝块但要密闭以防蒸发) ,或者-10℃最长达 14 天(不能反复冻融也不能 含有凝块和红细胞) 。 4.4 标本容器:盛放标本的容器应为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性 的不同规格的塑料离心管 4.5 标本外送:如涉及到需要外送的标本,必须以规定的容器(0.5ml 塑料离心管) 存放并密封, 并根据邮寄规则和要求进行包装, 运送时还要放入冰袋 (2-8℃) 或干冰 (-10℃) 由专人运送至指定地点指定接收人。 4.6 拒收标本:凡与 4.1-4.5 所述内容不符的标本,检验人员应向临床或就诊者说明 拒收标本的原因,并提出解决的方案或建议。 5.分析系统 5.1 分析仪器:为美国宝特公司提供的 ELX-800 型酶标仪,仪器校准请参见 仪器操作规程。
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此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度 0.5NCU/ml。

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SOP-MY-HIV-5
第 1 版第 1 次修改 第 60 页 共 70 页

5. 2 分析试剂: 为山东潍坊 3V 公司提供的配套的 HIV(1+2)试剂盒, 规格为 96test/ 盒,2-8℃贮存,有效期 12 个月;在效期内使用试剂。 5.3 质控试剂:为试剂盒中所附带的阴、阳性对照,2-8℃贮存,每月一次质控小结, 失控有记录及纠正结果。 6.操作方法 6.1 每孔加入待测标本 50 微升。 6.2 充分混匀,封板,置 37℃孵育 60 分钟。 6.3 手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置 5 秒,甩干,重复 5 次后拍干。 洗板机洗板:选择洗涤 5 次程序洗板后拍干。 6.4 除空白对照孔外,每孔加入酶结合物 50 微升,充分混匀,封板,置 37℃孵育 30 分钟。 6.5 手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置 5 秒,甩干,重复 5 次后拍干。 洗板机洗板:选择洗涤 5 次程序洗板后拍干。 6.6 每孔加显色剂 A 液、B 液各 50 微升,充分混匀,封板,置 37℃ 孵育 15 分钟。 6.7 每孔加入终止液 50 微升,混匀。 6. 8 用酶标仪读数, 数值取波长 450nm (建议使用双波长的酶标仪比色, 参考波长 630nm) , 先用空白孔校零,然后读取各孔 OD 值。 7.质量控制操作程序 7.1 每次实验设阴性、阳性各 2 孔,并设空白对照 1 孔随常规标本一起检测。 7.2 质控结果登记到本年度的“免疫室定性检测项目室内质控登记表” 。 7.3 一旦发现失控,应即时查找和分析原因,并在该结果栏作详细的批注和记录解 决的过程;失控情况处理及原因分析详见 8“失控处理” 。 7.4 每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。 8.失控处理操作程序 8.1 失控情况处理:操作者在分析质控结果时,如发现质控违背了控制规则,应填 写失控报告单,上交专业室主管(组长) ,由专业室主管(组长)做出是否发出或重测与质 控品相关的该批次病人标本检验报告的决定。 8.2 失控原因分析:失控信号的出现受多种因素的影响,这些因素包括操作上的失

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